2 结果
2.1 脂质体的制备和表征
2.1.1 导向化合物的合成 生物质谱分析反应产物DSPE-PEG-RDP的结果如Fig1所示。RDP相对分子质量为3671，DSPE-PEG-NHS分子质量为3094，得到的产物DSPE-PEG-RDP相对分子质量约为6800，说明导向化合物制备成功。
2.1.2 脂质体的粒径、zeta电位、分散度及包封率 CUR-L和RDP-CUR-L粒径、zeta电位、分散度和包封率如Tab2所示。结果表明，CUR-L粒径为(81.20±5.13)nm，而RDP-CUR-L经RDP修饰过后粒径为(98.56±6.97)nm，分散性良好，包封率均大于85%，制备重现性较好。
2.1.3 脂质体稳定性 CUR-L和RDP-CUR-L4℃冰箱放置60d后，溶液依旧澄清透明，呈淡黄色乳光，与新制备时相比无明显变化。不同时间点测其包封率，可以看出RDP修饰对姜黄素脂质体包封率影响不大，60d后CUR-L和RDP-CUR-L的包封率仍然在80%左右，可见稳定性良好。
2.1.4 导向化合物DSPE-PEG-RDP比例筛选 结果如Fig3所示，当加入的DSPE-PEG-RDP为总摩尔量的1.0%时，RDP-CUR-L对U87细胞的抑制作用明显优于CUR-L(P<0.01)。随着DSPE-PEG-RDP比例的增加，U87细胞的存活率逐渐降低，这表明在脂质体的PEG链端连接RDP能增强对U87细胞的抑制作用，当加入比例达5.0% 时，RDP-CUR-L对U87细胞的抑制作用最强，与0.5%时相比差异有显著性(P<0.05)。当比例超过1%时，RDP-CUR-L对U87细胞的抑制变化不明显，表明继续增加DSPE-PEG-RDP的量并不能提高RDP-CUR-L对U87细胞的抑制率。密度筛选实验结果表明，DSPE-PEG-RDP的加入比例能影响脂质体的靶向效率。出于实验效果和经济性考虑，选取加入比例为1.0%进行以下的实验
。2.1.5 体外药物释放 由于姜黄素在水中几乎不溶解，采用加入2% 十二烷基硫酸钠(SDS)的人工胃液为释放介质，考察姜黄素制剂的释药情况。结果如Fig4所示，CUR-L在前6h内大量释放，累计释放量接近60%，而后进入慢速释放期，12h释放量约为80%，而RDP-CUR-L释放在该释放介质中较慢，6h后释放约45%，24h后累积释放量不到80%，表明RDP-CUR-L有着更好的缓释作用。
2.2 姜黄素悬浮液和脂质体的体内分布
2.2.1 方法学考察
在上述色谱条件下，方法专属性良好，峰形良好，保留时间约为14min，组织中的内源性物质不干扰样品测定，见Fig5。样品中的姜黄素在1.5625～50mg·L-1线性关系良好(r=0.9994)。方法回收率为(95.87±4.98)%，高、中、低3个浓度的提取回收率分别为(94.79±1.94)%、(95.26±2.87)% 和(95.18±1.78)% (n=5)，日内精密度和日间精密度小于15%，均符合生物样品分析方法的要求。
2.2.2 体内分布和脑靶向作用考察
小鼠尾静脉注射CUR、CUR-L、RDP-CUR-L后不同时间各组织中的姜黄素分布见Fig6。注射CUR后，随着时间的推移，姜黄素在各个脏器中含量逐渐减少，姜黄素大量分布在肺、肝、肾等脏器中，心、脾中也有少量分布，然而由于血脑屏障的作用，脑部并未检测到姜黄素。注射CUR-L后，由于易被网状内皮系统吞噬，姜黄素主要分布在肝、肾、肺中，在脑、脾中少量分布，而在心脏中没有检测到姜黄素。RDP-CUR-L经尾静脉给药后大致分布与CUR-L类似，但在脑中检测到大量的姜黄素，并且在小鼠体内的滞留时间明显延长，24h仍然能在脑中检测到姜黄素。
3 讨论
脂质体作为药物载体具有使药物被动靶向网状内皮系统、延长药物作用时间、减少药物不良反应、提高疗效等优点。表面经柔性高分子PEG修饰，增大了脂质体的空间位阻，同时提高了膜表面亲水性，使得其不易被网状内皮系统(reticularepithelialsystem，RES)摄取，因而PEG化的脂质体较普通脂质体更长效。虽然脂质体经PEG修饰后能够延长在体内的循环时间，增加在肿瘤组织中的聚集，但是由于“PEGdilemma”现象的存在，阻碍了肿瘤细胞对脂质体的内吞，故在脂质体的PEG链端连接靶向配体如叶酸、转铁蛋白、抗-EGFR抗体等，使得靶向配体与肿瘤细胞过度表达的受体特异性结合，通过“配体-受体”特异性识别与结合作用，能够促进细胞对载体的$吞，增加药物的抗肿瘤效果，并且可以定向地将药物运送到靶部位，实现对肿瘤组织的“主动靶向”。脂质体或者纳米粒子表面修饰特异性配体或受体，主动靶向特定肿瘤组织的文献已有大量报道。一些常见的细胞穿膜肽，如TAT、多聚Arg、转运素，已被证实能够在体外将核酸、蛋白等小分子物质转导入培养的细胞。Khafagy等研究发现，L-型穿膜肽penetratin可以明显增加胰岛素的渗透性，从而使其穿过鼻膜，并不会对鼻吸收黏膜上的细胞完整性造成明显的破坏。据文献报道，另一个从狂犬病毒糖蛋白衍生出的一个小肽与多聚Arg连接后，能够输送siRNA靶向性地进入中枢神经系统，导致相关基因沉默。KaiPharmaceutical公司应用Tat引导蛋白激酶C抑制剂的蛋白调节子，用于脑缺血和急性心肌缺血的治疗，并且已于2007年进入了Ⅱ期临床试验。然而，用细胞穿膜肽引导脂质体等纳米载体进入特定的组织，特别是脑组织的文献却并不多见。普通CPPs虽然能介导各类分子入胞，但是其缺乏细胞特异性，而本实验中所用的细胞穿膜肽RDP是一种来源于狂犬病毒糖蛋白RVG，并经过结构改造而得到的一种能靶向中枢神经系统、具有很强嗜神经性的衍生肽，同时具有良好的穿膜特性和对神经细胞的高度选择性。
实验室前期研究已表明RDP能够引导核酸、多肽等小分子物质入脑，而本实验中通过体内分布实验证明了RDP连接的姜黄素脂质体在体内运输过程中没有发生断裂，确实能够携带包裹了姜黄素的脂质体入脑，不仅仅拥有理论意义，也具有潜在的应用价值。这为脑部疾病的治疗提供了新的思路。
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