1.3 永生化神经干细胞
永生化指的是在细胞发展的过程当中，利用基因工程化技术使细胞周期的连续性得以保存。通过体外基因调控神经干细胞得以永生化，其最常用的方法是将编码后的癌基因蛋白的部分基因片段利用逆转录病毒载体转导入胚胎神经干细胞中，细胞终末分化被阻止，在空间上处于未分化状态，细胞的传代能力被提高。目前证实不同部位、不同年龄结构的神经干细胞，通过转入不同形式的myc、nen、p53、腺病毒EIA以及SV40大T抗原使其具有永生化。细胞的自发性永生化几率非常小，人类细胞的__永生化几率更是罕见。因此，研究者们努力提高永生化的发生率，利用基因转染等技术手段，主要将各种外源性永生化基因导入靶细胞当中例如病毒、原癌基因和抑癌基因突变体等达到细胞永生化的目的。端粒是存在于染色体末端，有重复的TTAGGG序列，它具有防止染色体降解、端端融合、重排和染色体丢失等功能，研究者们对多种永生细胞的端粒长度检测时发现，永生化细胞分裂过程当中其端粒并未出现丢失的现象，这有可能提示细胞增殖能力的无限化可能与端粒长度的维持有某种必然的联系，这为神经干细胞永生化提供了相对的理论机制。神经干细胞具有良好的多分化潜能，而永生化的神经干细胞是否能够依然保持这种良好的特性。研究发现，多数永生化神经干细胞制备主要是通过利用温度敏感型突变SV40大T抗原，然而分析表明这种制备的永生化神经干细胞，癌基因的表达不能够被充分地下调，如果去尝试使细胞最终分化将会导致细胞的凋亡。因此，在构建永生化神经干细胞时，若能充分下调癌基因的表达并使其具有可调控性是十分重要的，同时我们又要考虑到神经干细胞的分化情况，若能构建不需要营养生长因子而能使细胞分化为目的细胞的系统那就更为的理想。Hoshimarn等使用了四环素控制的基因表达系统，通过逆转录病毒载体构建了LINXVmyc，并稳定转染于体外分离培养的成年鼠海马神经干细胞，这种神经干细胞在体外可以稳定地转染克隆，v-myc转录是可被四环素所调节的，当在细胞培养液中添加四环素后，本身分裂的细胞停止分裂，并且在添加四环素5 d后，NFH 阳性的细胞占绝大多数，tau阳性细胞半数以上，Vimentin为阴性，这些现象说明癌基因表达可被低浓度四环素所调控，呈现下调趋势，且细胞分化较为彻底。近年，有研究者成功建立了一种永生化神经干细胞系，通过转染技术将外源性人端粒酶催化亚单位基因导入体外培养的神经干细胞中，建立了永生化神经干细胞系，这种神经干细胞不仅保存了基本特性，而且在长期的体外培养中可传至50代仍生长旺盛，分裂速度更加地迅速，可作为种子细胞。永生化神经干细胞作为合适的体外转基因治疗载体，较普通神经干细胞具有更多的优势：(1)永生化神经干细胞较普通干细胞具有良好的安全性，研究表明移植治疗中，永生化的细胞在移植体中与组织地嵌合十分完整;(2)移植治疗当中不需要特殊的免疫反应药物，不引起免疫反应;(3)永生化细胞作为基因治疗的靶细胞时，较普通干细胞更具有稳定性，基因表达更具备高效性;(4)目前研究表明利用药物控制的永生化神经干细胞表达系统，可调节被施加外源性作用因子调节的转移基因的表达;(5)永生化神经干细胞可控性较普通神经干细胞有较大地提高;(6)符合伦理道德。尽管，永生化神经干细胞的建立，为神经系统疾病治疗带来了新的希望，但我们也应该意识到正常细胞的基因组以及某些遗传性状被改变之后才能制备成永生化细胞，对其应用价值有待于进一步评价。2 神经干细胞研究的问题与展望
综上所述，基因修饰等技术构建的工程化神经干细胞能显著提高移植治疗中枢神经系统疾病的效果。但是，目前利用基因工程技术构建的神经干细胞，在的移植治疗技术中尚属开端，其仍然面临各种的难题：(1)中枢神经系统疾病的复杂较为特殊，在治疗过程的当中需要多种基因的参与，一种或两种基因的参与难以完成;(2)针对永生化神经干细胞，它是由正常细胞的基因组以及某些遗传性状被改变之后才被制备而成的，对其生理机制及应用价值有待进一步研究与评估;(3)研究用神经干细胞大部分经胚胎干细胞培养而来，其来源尚有理论争议;(4)工程化神经干细胞在移植入人体后，其存活、分化、迁移通过何种指标能够明确显示，这还需要进一步的研究。总之，工程化神经干细胞的前途是美好的，它在治疗中枢神经系统疾病发面的价值终会得到体现。
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